AAT Bioquest 20550/20552 Fluo-4 AM *Ultrapure Grade* *CAS 273221-67-3*

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美國AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學(xué)研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學(xué)家研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學(xué)檢測領(lǐng)域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù)。AAT Bioquest的產(chǎn)品幫助quan世界的科學(xué)家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學(xué)，免疫學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域。AAT Bioquest會不斷介紹新產(chǎn)品，快速的豐富各個領(lǐng)域的產(chǎn)品。

AAT Bioquest  20550  Fluo-4 AM *Ultrapure Grade* *CAS 273221-67-3* 1 mg

AAT Bioquest  20552  Fluo-4 AM *Ultrapure Grade* *CAS 273221-67-3* 5x50 ug

 AAT Bioquest Fluo-4 AM*超純級*

AAT Bioquest  20550  Fluo-4 AM *Ultrapure Grade* *CAS 273221-67-3* 1 mg，產(chǎn)品說明：

鈣測量對于許多生物學(xué)研究至關(guān)重要。結(jié)合鈣時顯示光譜響應(yīng)的熒光探針使研究人員能夠通過使用熒光顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、熒光光譜和熒光酶標(biāo)儀來研究細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度的變化。Fluo-3和Fluo-4是可見光可激發(fā)鈣指示劑中zui常用的。Fluo-4是Fluo-3的類似物，其中兩種氯取代基被氟取代，這導(dǎo)致488nm處的熒光激發(fā)增加，從而提高熒光信號水平。通過將溶解的指示劑直接添加到含有培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)皿中，細(xì)胞可以加載這些鈣指示劑的AM酯形式。然而，F(xiàn)luo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后僅在活細(xì)胞中發(fā)出中等熒光，并且需要苛刻的細(xì)胞負(fù)載條件才能最大限度地提高其細(xì)胞鈣反應(yīng)。Fluo-8®和Cal-520®鈣染料已被開發(fā)用于改善細(xì)胞負(fù)荷和鈣反應(yīng)，同時保持最大激發(fā)@~3nm和最大發(fā)射@~4nm的便捷Fluo-490和Fluo-520光譜波長。

平臺

熒光顯微鏡

Excitation FITC

Emission FITC

推薦板 黑色墻壁/透明底部

熒光酶標(biāo)儀

Excitation 490

Emission 525

Cutoff     515

推薦板 黑色墻壁/透明底部

儀器規(guī)格 底部讀取模式/可編程液體處理

示例協(xié)議

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

氟-4 AM *超純級*儲備溶液

在高質(zhì)量無水DMSO中制備2至5 mM的Fluo-4 AM儲備溶液。

工作溶液的制備

氟-4 AM *超純級*儲備溶液

在實驗當(dāng)天，將Fluo-4 AM溶解在DMSO中或?qū)⒅甘緞﹥淙芤旱牡确衷嚇咏鈨鲋潦覝亍Ｔ谀x擇的緩沖液（例如，Hanks 和 Hepes 緩沖液）中制備含有 2.20% Pluronic® F-0 的染料工作溶液。對于大多數(shù)細(xì)胞系，建議使用終濃度為04-127μM的Fluo-4 AM。細(xì)胞上樣所需指標(biāo)的確切濃度必須根據(jù)經(jīng)驗確定。

注意非離子洗滌劑Pluronic® F-4有時用于增加Fluo-5 AM的水溶性。各種Pluronic® F-127解決方案可以從AAT Bioquest購買。

注意 如果您的細(xì)胞含有有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白，則可以將丙huang舒（4-127 mM）添加到染料工作溶液中（最終孔濃度為1.2-0 mM），以減少脫酯指示劑的泄漏。多種ReadiUse™丙huang舒產(chǎn)品，包括水溶性、鈉鹽和穩(wěn)定溶液，均可從AAT Bioquest購買。

實驗方案樣本

以下是我們推薦的將AM酯加載到活細(xì)胞中的方案。此協(xié)議僅提供指南，應(yīng)根據(jù)您的特定需求進(jìn)行修改。

1. 在生長培養(yǎng)基中制備細(xì)胞過夜。

2. 第二天，將1X Fluo-4 AM工作溶液添加到細(xì)胞板中。

注意 如果您的化合物干擾血清，請在上樣染料之前用新鮮的 HHBS 緩沖液替換生長培養(yǎng)基。

3. 將裝載染料的板在37°C的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育30至60分鐘。

注意 孵育染料超過 2 小時可以提高某些細(xì)胞系的信號強度。

4. 用您選擇的HHBS或緩沖液（含有陰離子轉(zhuǎn)運蛋白抑制劑，如1 mM丙huang舒，如果適用）替換染料工作溶液，以去除任何多余的探針。

5. 根據(jù)需要添加xing奮劑，并使用配備FITC濾光片組的熒光顯微鏡或包含可編程液體處理系統(tǒng)（如FDSS，F(xiàn)LIPR或FlexStation）的熒光板讀數(shù)器在490/525 nm截止值515nm處同時測量熒光。

AAT Bioquest  20552  Fluo-4 AM *Ultrapure Grade* *CAS 273221-67-3* 5x50 ug，產(chǎn)品說明：

熒光顯微鏡

興奮 FITC

排放 FITC

推薦板 黑色墻壁/透明底部

熒光酶標(biāo)儀

興奮 490

排放 525

近路 515

推薦板 黑色墻壁/透明底部

儀器規(guī)格 底部讀取模式/可編程液體處理

鈣測量對于許多生物學(xué)研究至關(guān)重要。結(jié)合鈣時顯示光譜響應(yīng)的熒光探針使研究人員能夠通過使用熒光顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、熒光光譜和熒光酶標(biāo)儀來研究細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度的變化。Fluo-3和Fluo-4是可見光可激發(fā)鈣指示劑中zui常用的。Fluo-4是Fluo-3的類似物，其中兩種氯取代基被氟取代，這導(dǎo)致488nm處的熒光激發(fā)增加，從而提高熒光信號水平。通過將溶解的指示劑直接添加到含有培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)皿中，細(xì)胞可以加載這些鈣指示劑的AM酯形式。然而，F(xiàn)luo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后僅在活細(xì)胞中發(fā)出中等熒光，并且需要苛刻的細(xì)胞負(fù)載條件才能最大限度地提高其細(xì)胞鈣反應(yīng)。Fluo-8®和Cal-520®鈣染料已被開發(fā)用于改善細(xì)胞負(fù)荷和鈣反應(yīng)，同時保持最大激發(fā)@~3nm和最大發(fā)射@~4nm的便捷Fluo-490和Fluo-520光譜波長。

物理性質(zhì)

解離常數(shù)（Kd， nM）： 345

分子量：1096.95

溶劑：二甲基亞胺

光譜特性

消光系數(shù)（厘米-1M-1) ：82000

激發(fā)（納米）：495

發(fā)射（納米）：528

量子產(chǎn)率：0.161

儲存

儲存條件：冷凍（<-15°C）;盡量減少光照

 AAT Bioquest Fluo-4 AM*超純級*

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