AAT Bioquest16315 Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Peroxynitrite Assay Kit *Green Fluorescence* 100Tests

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美國AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學(xué)研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學(xué)家研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學(xué)檢測領(lǐng)域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù)。AAT Bioquest的產(chǎn)品幫助quan世界的科學(xué)家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學(xué)，免疫學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域。AAT Bioquest會不斷介紹新產(chǎn)品，快速的豐富各個(gè)領(lǐng)域的產(chǎn)品。

AAT Bioquest16315 Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Peroxynitrite Assay Kit *Green Fluorescence* 100Tests，產(chǎn)品簡介：

產(chǎn)品品牌：AAT Bioquest

產(chǎn)品貨號：16315

產(chǎn)品名稱：Cell Meter™熒光細(xì)胞內(nèi)過氧化ya氮測定試劑盒*綠色熒光*

英文名稱：Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Peroxynitrite Assay Kit *Green Fluorescence*

產(chǎn)品規(guī)格：100 Tests

 AATBioquest 熒光細(xì)胞內(nèi)過氧化ya氮試劑盒

產(chǎn)品說明：

過氧亞硝酸鹽（ONOO-）是一種強(qiáng)氧化性物質(zhì)和高活性硝化劑。過氧亞硝酸鹽是由細(xì)胞中產(chǎn)生的超氧自由基和一氧化氮之間的反應(yīng)形成的。它可以對多種生物分子造成損害，包括蛋白質(zhì)、酶、脂質(zhì)和核酸，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。同時(shí)，過氧亞硝酸鹽還可以通過促進(jìn)宿主對入侵病原體的防御反應(yīng)而在體內(nèi)具有保護(hù)活性。因此，過氧亞硝酸鹽是一種必需的生物氧化劑，參與一系列生理和病理過程。由于其極短的半衰期和低穩(wěn)態(tài)濃度，檢測和理解過氧亞硝酸鹽在生物系統(tǒng)中的作用一直具有挑戰(zhàn)性。亞洲空運(yùn)中心生物探索的DAX-J2™ PON Green就是為了解決這一未滿足的需求而開發(fā)的。它提供了一種靈敏的工具來監(jiān)測活細(xì)胞中的ONOO-水平。亞洲空運(yùn)中心生物探索的DAX-J2™ PON Green與細(xì)胞間ONOO-發(fā)生特異性反應(yīng)，產(chǎn)生亮綠色熒光產(chǎn)品。它可用于熒光成像、流式細(xì)胞術(shù)和基于熒光酶標(biāo)儀的測定。

平臺

熒光顯微鏡

Excitation 490 納米

Emission 530 納米

推薦板 黑色墻壁/透明底部

儀器規(guī)格 FITC過濾器套件

熒光酶標(biāo)儀

Excitation 490 納米

Emission 530 納米

Cutoff 515 納米

推薦板 黑色墻壁/透明底部

儀器規(guī)格 底部讀取模式

組件

組件 A：DAX-J2™ PON 綠色 1瓶

組分B：檢測緩沖液 1 瓶（1 毫升/瓶）

組件C：DMSO 1 瓶（100 μL/瓶）

示例協(xié)議

一目了然

協(xié)議摘要

1. 在生長培養(yǎng)基中制備細(xì)胞

2. 將細(xì)胞與測試化合物和 DAX-J2™ PON Green 工作溶液共孵育 37oC 表示所需時(shí)間段

3. 在Ex/Em = 490/530 nm（截止= 515 nm）下監(jiān)測熒光強(qiáng)度

重要說明

在開始實(shí)驗(yàn)之前，將所有試劑盒組件置于室溫下。

儲備液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

1. DAX-J2 PON Green 儲備溶液 （500X）：

將 20 μL DMSO（組分 C）加入 DAX-J2™™ PON Green （組分 A）小瓶中，混合均勻。注意：20 μL 重構(gòu) DAX-J2™ PON Green 儲備溶液足以制作 1 個(gè)板。

工作溶液的制備

將 10 μL 500X DMSO 重構(gòu)的 DAX-J2™ 過氧亞硝酸鹽傳感器儲備溶液加入 500 μL 檢測緩沖液（組分 B）中并充分混合。注意：工作溶液不穩(wěn)定;使用前根據(jù)需要準(zhǔn)備。

實(shí)驗(yàn)方案樣本

1. 在細(xì)胞板中每孔加入 10 μL/孔（96 孔板）或 2.5 μL/孔（384 孔板）DAX-J2™ PON Green 工作溶液中。注意：染色前無需清洗細(xì)胞。建議在全培養(yǎng)基中對細(xì)胞進(jìn)行染色。

2. 將細(xì)胞與 DAX-J2™ PON Green 與測試化合物在全培養(yǎng)基或所需的緩沖液中在 37°C 下共同孵育所需的時(shí)間，避光。對于對照孔（未處理的細(xì)胞），加入相應(yīng)量的復(fù)合緩沖液。注意：建議在全培養(yǎng)基中對細(xì)胞進(jìn)行染色。但是，如果測試化合物對血清敏感，則可以在染色前吸走生長培養(yǎng)基和血清因子。抽吸后加入 90 μL/孔（96 孔板）和 22.5 μL/孔（384 孔板）的 1X Hank 鹽溶液和 20 mM Hepes 緩沖液 （HHBS） 或您選擇的緩沖液。或者，可以在無血清培養(yǎng)基中對細(xì)胞進(jìn)行染色。我們將 RAW 264.7 巨噬細(xì)胞與 50 - 200 μM SIN-1 和 DAX-J2™ PON Green 在 37°C 的全培養(yǎng)基中共孵育 1 小時(shí)以誘導(dǎo)過氧亞硝酸鹽。有關(guān)詳細(xì)信息，請參見圖 1。

3. 或者，用 DAX-J2™ PON Green 在 37°C 下對細(xì)胞進(jìn)行染色 1 小時(shí)，避光。取出工作溶液，然后在全培養(yǎng)基或所需的緩沖液中用測試化合物在37°C下處理細(xì)胞所需的時(shí)間。

4. 使用酶標(biāo)儀在Ex / Em = 490 / 530 nm（截止= 515nm）下以底部讀取模式監(jiān)測熒光增加，或使用帶有FITC濾光片的熒光顯微鏡拍攝圖像。

  AATBioquest 熒光細(xì)胞內(nèi)過氧化ya氮試劑盒

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