AAT Bioquest 11552/11553 Amplite® Fluorimetric Peroxidase (HRP) Assay Kit *Red/*Near Fluorescence*

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美國AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學家研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學檢測領域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術。AAT Bioquest的產(chǎn)品幫助quian世界的科學家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學，免疫學，細胞生物學和分子生物學等領域。AAT Bioquest會不斷介紹新產(chǎn)品，快速的豐富各個領域的產(chǎn)品。

AAT Bioquest 11552 Amplite® Fluorimetric Peroxidase (HRP) Assay Kit *Red Fluorescence*  500 Tests

AAT Bioquest  11553  Amplite® Fluorimetric Peroxidase (HRP) Assay Kit *Near Infrared Fluorescence*  500 Tests

 AAT Bioquest Amplite熒光過氧化物酶試劑盒

AAT Bioquest 11552 Amplite® Fluorimetric Peroxidase (HRP) Assay Kit *Red Fluorescence*  500 Tests，產(chǎn)品說明：

過氧化物酶是一種小分子（MW ~40 KD），通?？梢砸?：1的比例與抗體偶聯(lián)。由于其體積小，它很少引起抗體/抗原復合物形成的空間位阻問題。與其他標記酶相比，過氧化物酶價格低廉。與過氧化物酶相關的主要缺點是它們對許多防腐劑（例如疊***）的耐受性低，即使在低濃度下也能使過氧化物酶活性失活。HRP 偶聯(lián)物可廣泛用于 ELISA、免疫組織化學技術以及北部、南部和西部印跡分析中的二級檢測試劑。我們在一步法、均質(zhì)、無洗滌檢測系統(tǒng)中提供這種快速（10 分鐘）HRP 檢測。該試劑盒可用于 ELISA、表征酶反應動力學和氧化酶抑制劑的高通量篩選等。該試劑盒提供優(yōu)化的“混合和讀取"檢測方案，與 HTS 液體處理儀器兼容。

平臺

吸光度酶標儀

吸光度 576 ±5 納米

推薦板 清除底部

熒光酶標儀

Excitation 540 納米

Emission 590 納米

Cutoff     575 納米

推薦板 純黑色

組件

組分A：Amplite™紅過氧化物酶底物 1瓶

組分B：H2O2 1 瓶（3% 穩(wěn)定溶液，200 μL）

組分C：檢測緩沖液 1 瓶 （100 mL）

組分D：辣根過氧化物酶 1瓶（20單位）

構成部分E：DMSO 1 瓶 （0.5 mL）

示例協(xié)議

一目了然

協(xié)議摘要

1. 制備 HRP 標準品和/或測試樣品 （50 μL）

2. 加入 HRP 工作溶液 （50 μL）

3. 在室溫下孵育 10 - 30 分鐘

4. 在Ex/Em = 540/590 nm（截止值= 575 nm）下監(jiān)測熒光強度

重要事項 在開始實驗之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。組分A在DTT和β-巰基乙*等硫醇存在下不穩(wěn)定。濃度高于10μM的硫醇的存在會顯著降低測定動態(tài)范圍。NADH和谷胱gan肽（還原形式：GSH）可能會干擾測定。

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環(huán)。

1. Amplite™ 紅過氧化物酶底物儲備溶液 （100X）

將 250 μL DMSO（組分 E）加入到安培紅色過氧化物酶底物（組分 A）的小瓶中，制成 100X Amplite ™™紅過氧化物酶底物儲備溶液。應及時使用儲備溶液。避光保存。

2. HRP 標準溶液 （20 U/mL）

將 1 mL 測定緩沖液（組分 C）加入辣根過氧化物酶（組分 D）小瓶中，制成 20 U/mL HRP 標準溶液。

3. H₂O₂儲備溶液 （20 mM）

加入 22.7 μL 的 3% H₂O₂（0.88 M，組分 B）放入 977 μL 檢測緩沖液（組分 C）中，制成 20 mM H₂O₂儲備液 .注意：稀釋后的 H₂O₂溶液不穩(wěn)定。未使用的部分應丟棄。

標準溶液的制備

人力資源生產(chǎn)標準

在 1 μL 測定緩沖液（組分 C）中加入 20 μL 1999 U/mL HRP 標準溶液，得到 10 mU/mL HRP 標準溶液 （SD7）。取 10 mU/mL HRP 標準溶液 （SD7） 并進行 1：3 連續(xù)稀釋，以獲得帶有測定緩沖液（組分 C）的連續(xù)稀釋的 HRP 標準品 （SD6 - SD1）。

工作溶液的制備

加入 50 μL 100X Amplite™ 紅色過氧化物酶底物儲備溶液和 50 μL 20 mM H2O2將溶液儲備到 4.9 mL 的測定緩沖液（組分 C）中，制成 HRP 工作溶液。避光保存。

實驗方案樣本

表 1. HRP標準品和測試樣品在純黑色96孔微孔板中的布局。SD= HRP 標準品（SD1 - SD7，0.01 至 10 mU/mL）;BL=空白控件;TS=測試樣品。

表 2. 每個孔的試劑組成。

1. 根據(jù)表1和表2中提供的布局制備HRP標準品（SD），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于 384 孔板，每孔使用 25 μL 試劑而不是 50 μL。 注意：高水平的 HRP（例如，>100 mU/mL 最終濃度）可能會由于 Amplite™ Red 的過度氧化（到非熒光燈）而導致熒光信號降低。

2. 向HRP標準品、空白對照和測試樣品的每個孔中加入50 μL HRP工作溶液，使HRP測定總體積為100 μL/孔。對于 384 孔板，向每個孔中加入 25 μL HRP 工作溶液，總體積為 50 μL/孔。

3. 將反應在室溫下孵育10至30分鐘，避光。

4. 使用熒光板讀數(shù)器在激發(fā)= 540±10nm，發(fā)射= 590±10nm（最佳Ex / Em = 540 / 590 nm，截止= 575 nm）監(jiān)測熒光增加。注意：板的內(nèi)容物也可以轉移到白色透明底板上，并由吸光度酶標儀在576±5nm的波長下讀取。與熒光讀數(shù)相比，吸收檢測的靈敏度較低。

AAT Bioquest  11553  Amplite® Fluorimetric Peroxidase (HRP) Assay Kit *Near Infrared Fluorescence*  500 Tests，產(chǎn)品說明：

過氧化物酶是一種小分子（MW ~40 KD），通常可以以4：1的比例與抗體偶聯(lián)。由于其體積小，它很少引起抗體/抗原復合物形成的空間位阻問題。與其他標記酶相比，過氧化物酶價格低廉。與過氧化物酶相關的主要缺點是它們對許多防腐劑（例如疊***）的耐受性低，即使在低濃度下也能使過氧化物酶活性失活。HRP 偶聯(lián)物可廣泛用于 ELISA、免疫組織化學技術以及北部、南部和西部印跡分析中的二級檢測試劑。我們在一步法、均質(zhì)、無洗滌檢測系統(tǒng)中提供這種快速（10 分鐘）HRP 檢測。該試劑盒使用我們的近紅外熒光HRP基質(zhì)Amplite® IR。Amplite® IR 產(chǎn)生的物質(zhì)最大吸收為 647 nm，最大發(fā)射波長為 670 nm。這種近紅外吸收和熒光最大限度地減少了通常由生物樣品的自吸收和/或自發(fā)熒光引起的測定背景，這些樣品很少吸收超過600 nm的光。該試劑盒可用于 ELISA、表征酶反應動力學和氧化酶抑制劑的高通量篩選等。該試劑盒提供優(yōu)化的“混合和讀取"檢測方案，與 HTS 液體處理儀器兼容。

平臺

吸光度酶標儀

吸光度 647 ±5 納米

推薦板 清除底部

熒光酶標儀

Excitation 640 納米

Emission 680 納米

Cutoff     665 納米

推薦板 純黑色

組件

組分A：Amplite™紅過氧化物酶底物 1瓶

組分B：H₂O₂ 1 瓶（3% 穩(wěn)定溶液，200 μL）

組分C：檢測緩沖液 1 瓶 （100 mL）

組分D：辣根過氧化物酶 1瓶（20單位）

構成部分E：DMSO 1 瓶 （0.5 mL）

示例協(xié)議

一目了然

協(xié)議摘要

5. 制備 HRP 標準品和/或測試樣品 （50 μL）

6. 加入過氧化物酶工作溶液（50 μL）

7. 在室溫下孵育 30 - 60 分鐘

8. 在Ex/Em = 640/680 nm（截止值= 665 nm）下監(jiān)測熒光強度

重要事項 在開始實驗之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。組分A在DTT和β-巰基乙*等硫醇存在下不穩(wěn)定。濃度高于10μM的硫醇的存在會顯著降低測定動態(tài)范圍。NADH和谷胱gan肽（還原形式：GSH）可能會干擾測定。

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環(huán)。

1. Amplite™ IR 過氧化物酶底物儲備溶液 （100X）

將 250 μL DMSO（組分 E）加入到安培 IR 過氧化物酶底物（組分 A）的小瓶中，制成 100X 安培™™紅外過氧化物酶底物儲備溶液。

2. HRP 標準溶液 （20 U/mL）

將 1 mL 測定緩沖液（組分 C）加入辣根過氧化物酶（組分 D）小瓶中，制成 20 U/mL HRP 標準溶液。

3. H2O2儲備溶液 （20 mM）

加入 22.7 μL 的 3% H2O2（0.88 M，組分 B）放入 977 μL 檢測緩沖液（組分 C）中，制成 20 mM H2O2儲備溶液。注意：稀釋后的 H2O2溶液不穩(wěn)定。未使用的部分應丟棄。

標準溶液的制備

人力資源生產(chǎn)標準

將 15 μL 20 U/mL HRP 標準溶液加入 985 μL 檢測緩沖液（組分 C）中，得到 300 mU/mL HRP 標準溶液 （SD7）。取300 mU/mL HRP標準溶液（SD7）并進行1：3連續(xù)稀釋，以獲得帶有測定緩沖液（組分C）的連續(xù)稀釋HRP標準品（SD6 - SD1）。

工作溶液的制備

加入 50 μL 100X Amplite™ IR 過氧化物酶底物儲備溶液和 50 μL 20 mM H₂O₂將溶液儲備到 4.9 mL 的檢測緩沖液（組分 C）中，制成過氧化物酶工作溶液。避光保存。

實驗方案樣本

表 1. HRP標準品和測試樣品在純黑色96孔微孔板中的布局。SD=HRP標準品（SD1 - SD7，0.41至300 mU/mL），BL=空白對照，TS=測試樣品。

表 2. 每個孔的試劑組成。

1. 根據(jù)表1和表2中提供的布局制備HRP標準品（SD），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于 384 孔板，每孔使用 25 μL 試劑而不是 50 μL。

2. 向HRP標準品、空白對照和測試樣品的每個孔中加入50 μL過氧化物酶工作溶液，使總過氧化物酶測定體積為100 μL/孔。對于 384 孔板，向每個孔中加入 25 μL 過氧化物酶工作溶液，總體積為 50 μL/孔。

3. 將反應在室溫下孵育30至60分鐘，避光。

4. 使用熒光板讀數(shù)器在激發(fā)= 600 - 650 nm，發(fā)射= 650 - 690 nm（最佳Ex / Em = 640/680 nm，截止= 665 nm）下監(jiān)測熒光增加。注意： 板的內(nèi)容物也可以轉移到白色透明底板上，并由吸光度酶標儀在647±5nm的波長下讀取。與熒光讀數(shù)相比，吸收檢測的靈敏度較低。

  AAT Bioquest Amplite熒光過氧化物酶試劑盒

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