AAT Bioquest 11503/11504 Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Green/*Blue Fluorescence*

我們北京云肽生物科技有限公司作為AAT Bioquest公司的特約經(jīng)銷商為客戶提供，正規(guī)進(jìn)口，保證原裝正品，貨期穩(wěn)定的服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

美國AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學(xué)研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學(xué)家研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù)。AAT Bioquest的產(chǎn)品幫助quan世界的科學(xué)家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學(xué)，免疫學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域。AAT Bioquest會(huì)不斷介紹新產(chǎn)品，快速的豐富各個(gè)領(lǐng)域的產(chǎn)品。

AAT Bioquest  11503 Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Green Fluorescence* 100 Tests

AAT Bioquest  11504 Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Blue Fluorescence* 100 Tests

 AATBioquestCell Meter過氧化氫測(cè)定試劑盒

AAT Bioquest  11503 Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Green Fluorescence* 100 Tests，產(chǎn)品說明：

過氧化*（H2O2）是一種活性氧代謝副產(chǎn)物，可作為許多氧化應(yīng)激相關(guān)狀態(tài)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑。它涉及許多與哮喘、動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病血管病變、骨質(zhì)疏松癥、許多神經(jīng)退行性疾病和唐氏綜合癥有關(guān)的生物事件。也許過氧化*生物學(xué)最有趣的方面是最近的報(bào)道，即抗體具有將分子氧轉(zhuǎn)化為過氧化*的能力，有助于免疫系統(tǒng)的正常識(shí)別和破壞過程。測(cè)量這種反應(yīng)性物質(zhì)將有助于確定氧化應(yīng)激如何調(diào)節(jié)不同的細(xì)胞內(nèi)途徑。該細(xì)胞計(jì)™過氧化*檢測(cè)試劑盒使用我們du特的OxiVision™ Green過氧化*傳感器來量化活細(xì)胞中的過氧化*。OxiVision™ Green是細(xì)胞滲透性的，當(dāng)它與過氧化*反應(yīng)時(shí)會(huì)產(chǎn)生綠色熒光。該試劑盒是一種優(yōu)化的“混合和讀取"檢測(cè)形式，與 HTS 液體處理儀器兼容。

組件

組件 A： 1瓶

組分B：H2O2 1 瓶（3% 穩(wěn)定溶液，200 μL）

組分C：檢測(cè)緩沖液 1 瓶 （20 mL）

組件D：二甲基丙*酸甲* 1 瓶 （200 μL）

示例協(xié)議

一目了然

溶液分析方案摘要

1. 準(zhǔn)備并添加 Amplite™ 綠色過氧化物傳感器工作溶液 （50 μL）

2. 添加 H2O2標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品 （50 μL）

3. 在室溫下孵育 15 - 60 分鐘

4. 讀取Ex/Em = 490/525 nm時(shí)的熒光強(qiáng)度（截止= 515 nm）

重要說明

在開始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍所有試劑盒成分。

活細(xì)胞檢測(cè)方案摘要

1. 在生長培養(yǎng)基中制備細(xì)胞

2. 用Amplite™綠色過氧化物傳感器工作溶液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，并孵育所需的時(shí)間

3. 用測(cè)試化合物處理細(xì)胞

4. 在Ex/Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）下監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度，底部讀取模式

重要說明

Amplite™ 綠色過氧化物傳感器可以被動(dòng)加載到活細(xì)胞中并報(bào)告細(xì)胞內(nèi) H 的微摩爾變化2O2濃度。以下是建議的顯微鏡成像方案，可以修改以滿足特定的研究需求。

儲(chǔ)備液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

1. 安培綠色過氧化物傳感器儲(chǔ)備溶液 （250X）：

將 50 μL DMSO（組分 D）加入安培綠色過氧化物傳感器（組分 A）的小瓶中，制成 250X 安培™™綠色過氧化物™傳感器儲(chǔ)備溶液。避光。

2. H₂O₂標(biāo)準(zhǔn)溶液 （20 mM）：

加入 22.7 μL 的 3% H2O2（0.88 M，組分 B）放入 977 μL 檢測(cè)緩沖液（組分 C）中，制成 20 mM H₂O₂標(biāo)準(zhǔn)解決方案。注意：稀釋后的H₂O₂標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定。未使用的部分應(yīng)丟棄。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

H₂O₂ 標(biāo)準(zhǔn)

加入 50 μL 20 mM H2O2標(biāo)準(zhǔn)溶液到 950 μL 檢測(cè)緩沖液（組分 C）中，得到 1000 μM H₂O₂標(biāo)準(zhǔn)解決方案。取 1000 μM H₂O₂標(biāo)準(zhǔn)溶液并進(jìn)行 1：3 連續(xù)稀釋以獲得連續(xù)稀釋的 H₂O₂標(biāo)準(zhǔn)品（HS1 - HS7）與測(cè)定緩沖液（組分C）。

工作溶液的制備

將 20 μL 250X 安培™綠色過氧化物傳感器儲(chǔ)備溶液加入 5 mL 檢測(cè)緩沖液（組分 C）中，制成 Amplite™ 綠色過氧化物傳感器工作溶液。

實(shí)驗(yàn)方案樣本

1. 準(zhǔn)備H₂O₂標(biāo)準(zhǔn)品（HS）、空白對(duì)照（BL）和測(cè)試樣品（TS）根據(jù)表1和表2中提供的布局。對(duì)于 384 孔板，每孔使用 25 μL 試劑而不是 50 μL。

2. 向每個(gè) H 孔中加入 50 μL Amplite™ 綠色過氧化物傳感器工作溶液₂O₂標(biāo)準(zhǔn)、空白對(duì)照和測(cè)試樣品，使總H₂O₂測(cè)定體積為 100 μL/孔。對(duì)于 384 孔板，將 25 μL Amplite™ 綠色過氧化物傳感器工作溶液添加到每個(gè)孔中，總體積為 50 μL/孔。

3. 將反應(yīng)在室溫下孵育15至30分鐘，避光。

4. 使用熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測(cè)熒光增加，激發(fā)= 490±10，發(fā)射= 520±10nm（最佳Ex / Em = 490 / 525 nm，截止= 515 nm）。

運(yùn)行H₂O₂活細(xì)胞測(cè)定：

1. 根據(jù)需要激活單元格。

2. 用PBS緩沖液洗滌細(xì)胞，用100μL/孔Amplite™綠色過氧化物傳感器工作溶液孵育細(xì)胞5至60分鐘或您想要的時(shí)間。對(duì)于 384 孔板，加入 25 μL/孔的 Amplite™ 綠色過氧化物傳感器工作溶液。注意：對(duì)于動(dòng)力學(xué)測(cè)量，可以在添加處理之前對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色。

3. 使用熒光板讀數(shù)器（底部讀取模式）在Ex / Em = 490 / 525 nm（截止= 515 nm）下監(jiān)測(cè)熒光增加，或使用FITC通道用熒光顯微鏡對(duì)熒光變化進(jìn)行成像。

AAT Bioquest  11504 Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Blue Fluorescence* 100 Tests，產(chǎn)品說明：

過氧化*是一種活性氧代謝副產(chǎn)物，可作為許多氧化應(yīng)激相關(guān)狀態(tài)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑。它涉及許多與哮喘、動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病血管病變、骨質(zhì)疏松癥、許多神經(jīng)退行性疾病和唐氏綜合癥有關(guān)的生物事件。這種反應(yīng)性物質(zhì)的測(cè)量有助于確定氧化應(yīng)激如何調(diào)節(jié)各種細(xì)胞內(nèi)途徑。該細(xì)胞計(jì)™細(xì)胞內(nèi)熒光過氧化*檢測(cè)試劑盒使用我們du特的OxiVision™ Blue過氧化物傳感器來量化活細(xì)胞中的過氧化*。OxiVision™ 藍(lán)色過氧化物傳感器具有細(xì)胞滲透性，與過氧化*反應(yīng)時(shí)會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色熒光。該試劑盒提供了一種靈敏的工具，用于監(jiān)測(cè)活細(xì)胞中的過氧化*水平，并經(jīng)過優(yōu)化，可用于熒光顯微鏡。

組件

組件 A：OxiVision™ 藍(lán)色過氧化物傳感器 1瓶

組分B：檢測(cè)緩沖液 1 瓶 （20 mL）

組件C：DMSO 1 瓶 （100 μL）

示例協(xié)議

一目了然

協(xié)議摘要

1. 在生長培養(yǎng)基中制備細(xì)胞

2. 使用OxiVision™藍(lán)色過氧化物傳感器對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色

3. 用測(cè)試化合物處理細(xì)胞

4. 使用 DAPI 濾光片或防爆/電磁 = 405/450 nm 監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度

重要說明

在開始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍所有試劑盒成分。

儲(chǔ)備液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

1. OxiVision 藍(lán)色過氧化物傳感器儲(chǔ)備溶液 （500X）：

將 40 μL DMSO（組分 C）加入 OxiVision 藍(lán)色過氧化物傳感器（組分 A）的小瓶中，充分混合制成 500X OxiVision™™™ 藍(lán)色過氧化物傳感器儲(chǔ)備溶液。注意：20 μL 重構(gòu)的 OxiVision™ 藍(lán)色過氧化物傳感器儲(chǔ)備溶液足以用于 1 個(gè)板。應(yīng)及時(shí)使用儲(chǔ)備溶液。避光。

工作溶液的制備

將 10 μL 的 500X OxiVision 藍(lán)色過氧化物傳感器儲(chǔ)備溶液加入 500 μL 檢測(cè)緩沖液（組分 B）中，并充分混合，制成 OxiVision™™ 藍(lán)色過氧化物傳感器工作溶液。注意：此OxiVision™ 藍(lán)色過氧化物傳感器工作溶液不穩(wěn)定;使用前根據(jù)需要準(zhǔn)備。

實(shí)驗(yàn)方案樣本

1. 在 10 孔細(xì)胞板中每孔 96 μL 細(xì)胞培養(yǎng)物中加入 2 μL/孔（5 孔板）或 384.90 μL/孔（96 孔板）的 OxiVision™ 藍(lán)色過氧化物傳感器工作溶液，或在 22 孔細(xì)胞板中每孔加入 5.384 μL 細(xì)胞培養(yǎng)物。注意：染色前無需清洗細(xì)胞。建議在全培養(yǎng)基中對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色。

2. 用測(cè)試化合物在全培養(yǎng)基中或在所需的緩沖液中在 37°C 下處理細(xì)胞所需的時(shí)間。對(duì)于對(duì)照樣品（未處理的細(xì)胞），加入相應(yīng)量的復(fù)合緩沖液。注意：建議在全培養(yǎng)基中處理細(xì)胞。但是，如果測(cè)試化合物對(duì)血清敏感，則可以在治療前吸走生長培養(yǎng)基和血清因子。抽吸后，將1X Hank的鹽溶液和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的緩沖液添加到細(xì)胞中。或者，可以在無血清培養(yǎng)基中處理細(xì)胞。我們?cè)?00°C的全培養(yǎng)基中用37μM過氧化*處理Jurkat細(xì)胞90分鐘以誘導(dǎo)過氧化*。

3. 用DPBS洗滌細(xì)胞1-2次，并更換為100 uL /孔（用于96孔板）或25 uL /孔（用于384孔板）測(cè)定緩沖液（組分C）。

4. 使用帶有DAPI濾光片的熒光顯微鏡拍攝圖像。

 AATBioquestCell Meter過氧化氫測(cè)定試劑盒

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