AAT Bioquest10060 Amplite® Rapid Fluorimetric Glutathione GSH/GSSG Ratio Assay Kit *Green Fluorescence* 200Tests 

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美國(guó)AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學(xué)研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學(xué)家研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù)。AAT Bioquest的產(chǎn)品幫助quan世界的科學(xué)家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學(xué)，免疫學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域。AAT Bioquest會(huì)不斷介紹新產(chǎn)品，快速的豐富各個(gè)領(lǐng)域的產(chǎn)品。

 AAT 快速熒光谷胱*肽/GSSG比值測(cè)定試劑盒

AAT Bioquest 10060 Amplite® Rapid Fluorimetric Glutathione GSH/GSSG Ratio Assay Kit *Green Fluorescence* 200Tests，產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品品牌：AAT Bioquest

產(chǎn)品貨號(hào)：10060

產(chǎn)品名稱：Amplite®快速熒光谷胱*肽/GSSG比值測(cè)定試劑盒*綠色熒光*

英文名稱：Amplite® Rapid Fluorimetric Glutathione GSH/GSSG Ratio Assay Kit *Green Fluorescence*

產(chǎn)品規(guī)格：200 Tests

產(chǎn)品說明：

當(dāng)細(xì)胞暴露于增加的氧化應(yīng)激水平時(shí)，GSSG會(huì)積聚，GSH與GSSG的比例會(huì)降低。谷胱*肽還原酶將GSSG回收為GSH，同時(shí)氧化b-煙*胺腺嘌呤二核苷酸磷酸鹽。GSH / GSSG比率的監(jiān)測(cè)和生物樣品中GSSG的定量對(duì)于評(píng)估細(xì)胞和組織的氧化還原和解毒狀態(tài)至關(guān)重要，這與谷胱*肽對(duì)氧化和自由基介導(dǎo)的細(xì)胞損傷的保護(hù)作用有關(guān)。有一些試劑或檢測(cè)試劑盒可用于生物系統(tǒng)中硫醇的定量。然而，所有商業(yè)試劑盒要么缺乏靈敏度，要么協(xié)議繁瑣。我們的 Amplite® 快速熒光法 GSH/GSSG 比值試劑盒 （#10060） 提供了一種超靈敏的檢測(cè)方法，可定量樣品中的 GSH。該試劑盒使用專有的水溶性非熒光染料，與硫醇反應(yīng)后會(huì)發(fā)出強(qiáng)烈的熒光。該試劑盒提供了一種靈敏的一步熒光方法，可在 1 μL 測(cè)定體積中檢測(cè)低至 100 皮摩爾的半胱*酸或 GSH。該測(cè)定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式進(jìn)行，無需分離步驟即可輕松適應(yīng)自動(dòng)化。熒光酶標(biāo)儀可以輕松讀取其信號(hào)。

組件

組分 A：硫石™綠 520WS 1瓶

組分B：檢測(cè)緩沖液 1 瓶 （25 mL）

組件C：GSH標(biāo)準(zhǔn) 1 瓶 （62 μg）

組件D：GSSG探頭 1瓶（凍干粉）

構(gòu)成部分E：GSSG標(biāo)準(zhǔn) 1 瓶 （124 μg）

示例協(xié)議

一目了然

協(xié)議摘要

1. 制備谷胱*肽工作溶液（50 μL）

2. 添加GSH標(biāo)準(zhǔn)品和/或GSSG標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50 μL）

3. 在室溫下孵育 10 至 60 分鐘

4. 監(jiān)測(cè)Ex/Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）下的熒光增加

重要事項(xiàng) 在開始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。

儲(chǔ)備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

1. 谷胱*肽標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 mM）

將 200 μL 檢測(cè)緩沖液（組分 B）加入 GSH 標(biāo)準(zhǔn)品（組分 C）小瓶中，制成 1 mM （1 nmol/μL） GSH 標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2. GSSG 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 （1 mM）

加入 200 μL ddH2O 放入 GSSG 標(biāo)準(zhǔn)品（組分 E）的小瓶中，制成 1 mM （1 nmol/μL） GSSG 標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3. 硫石™綠520WS儲(chǔ)備液（100X）

加入 100 μL ddH2O放入小瓶中加入硫石綠520WS（組分A），制成100X硫石™™綠520WS儲(chǔ)備溶液。

注意 避光。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

GSH 或 GSSG 標(biāo)準(zhǔn)

制備的連續(xù)稀釋的GSH標(biāo)準(zhǔn)品（0至10 μM）：將10 μL 1 mM （1 nmol/μL） GSH標(biāo)準(zhǔn)溶液加入990 μL檢測(cè)緩沖液（組分B）中，以生成10 μM （10 pmol/μL）GSH標(biāo)準(zhǔn)溶液（GSH7）。取10 μM （10 pmol/μL）GSH標(biāo)準(zhǔn)溶液（GSH7），在測(cè)定緩沖液（組分B）中進(jìn)行1：2連續(xù)稀釋，以獲得連續(xù)稀釋的GSH標(biāo)準(zhǔn)品（GSH6 - GSH1）。注意：稀釋的GSH標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定。4小時(shí)內(nèi)用完。制備連續(xù)稀釋的GSSG標(biāo)準(zhǔn)品（0至5 μM）：將10 μL 1 mM （1 nmol / μL）GSSG標(biāo)準(zhǔn)溶液加入990 μL測(cè)定緩沖液（組分B）中，以生成10 μM （10 pmol/μL）GSSG標(biāo)準(zhǔn)溶液。取10 μM（10 pmol/μL）GSSG標(biāo)準(zhǔn)溶液，在測(cè)定緩沖液（組分B）中進(jìn)行1：2連續(xù)稀釋，以獲得連續(xù)稀釋的GSSG標(biāo)準(zhǔn)品（GSSG7 - GSSG1）。注意：稀釋的GSSG標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定。4小時(shí)內(nèi)用完。

工作溶液的制備

1. GSH工作解決方案

將 100 μL 100X 硫石™綠 520WS 儲(chǔ)備溶液加入 10 mL 檢測(cè)緩沖液（組分 B）中，并通過渦旋充分混合。

注意此GSH工作溶液（GSH-WS）足以用于兩個(gè)96孔板。避光時(shí)，它在4°C下穩(wěn)定至少4小時(shí)。

2. 總GSH工作解決方案

將 5 mL GSH-WS 加入 GSSG 探針（組分 D）瓶中并充分混合。

注意此總GSH工作溶液（TGSH-WS）足以用于一個(gè)96孔板。常溫下不穩(wěn)定，2小時(shí)內(nèi)應(yīng)及時(shí)使用。

注意 避免暴露在光線下。

注意或者，可以通過添加 25 μL ddH 來制作 200X GSSG 探頭2O放入GSSG探針（組分D）瓶中，然后將儲(chǔ)備溶液與GSH-WS按比例混合來制備TSGS-WS。

  AAT 快速熒光谷胱*肽/GSSG比值測(cè)定試劑盒

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